产品货号：
MQ0064
中文名称：
Y2HGold酵母感受态细胞
英文名称：
Y2HGold Chemically Competent Cell
产品规格：
10×100μl|50×100μl
发货周期：
1～3天
产品价格：
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Y2HGold菌株是GAL4系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Y2HGold有四个报告基因：AbAr、HIS3、ADE2、MEL1，分别由三种不同的启动子(G1、G2、M1)启动，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。此外新报告基因AbAr与以前的营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点，也可以降低酵母双杂假阳性发生的概率。
| 基因型 | =MATa,trp1-901,leu2-3,112,ura3-52,his3-200,gal4Δ,gal80Δ,LYS2::GAL1UAS–Gal1TATA–His3,GAL2UAS–Gal2TATA–Ade2 URA3::MEL1UAS–Mel1TATA AUR1-C MEL1 |
| 转化效率 | pGADT7质粒检测>104cfu/μg DNA。 |
| 组分 | 10×100μL | 50×100μL | 保存 |
| Y2HGold酵母感受态细胞 | 10×100μL | 50×100μL | -80℃ |
| Carrier DNA | 100μL | 100μL | -20℃ |
| PEG/LiAc | 5mL | 5mL | 4℃ |
保存：-80℃
- PEG在低温下易析出，请在常温下完全溶解后使用。
- 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
- Y2HGold酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27～30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
- 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，Y2HGold的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylaminoimidazole（AIR）在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
- 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆。
- 取一支无菌的1.5mL EP管，依次加入预冷的目的质粒1～3μg，Carrier DNA 10μL(95-100度5min快速冰浴，重复一次)，100μL冰上融化的感受态细胞，PEG/LiAc 500μL，轻轻翻转混匀6～8次；
- 30℃水浴30min，每10min轻轻翻转混匀6～8次；
- 每支加入20μL的二甲基亚砜（用以提高转化效率，可不做）；
- 42℃水浴15min，每5min轻轻翻转混匀6～8次；
- 12000rpm瞬时离心弃上清，每支加入1mL的YPD Plus（或YPDA）于30℃复苏1h（用以提高转化效率，可不做）；
- 12000rpm瞬时离心弃上清，用100μL 0.9% NaCl重悬，涂板，30℃培养48-96h。
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